Guherandinên ji bo her cureyên beşa polymerase ya Çain Reaction (PCR) dikare dikare kalîteya encama hilbijêrî, an jî bi rêya çêtir û kêmkirina hilber û hilberê hilberê an jî bi riya taybetmendiya replicasyona hestiyariyê. Parametersên ku bandorê encama bandorê bandorek dikare dibe (ango, germ, demjimêr) an jî kîmyewî (ango, tevlîhevkirina tîmasyonê, cureyê enzyme). Li jêr faktorên sereke hene ku serkeftina PCR bandor dikin.
01 Rewşên Paqij ên Paqijtir
Ji ber ku PCR dikare ji bo molekolekek yekbûyî ya DNA tê nasîn e, ew e ku girîng e ku rewşa şertên pristine di laboratîkê de biparêzin. Bi her dem herdem herikên kincê bikişînin, ji alîgirên germê, til û pişkên pisîn û çareseriyên nexil bikar bînin, û berî karê destpêkê de xebatê kar bikin.
Bi tevahî reaksiyonên kontrolkirinê de, bêyî ku DNA û bêyî enzyme de, hebin ku encamên rastî ji bo amplification of right right.
Gelek kes piştrast bikin ku ji bo çareseriyên xwe yên çareseriyê yên ku ne ji bo çareserkirina pirsgirêkên hêsantir çêbikin û pîpên navnîşên navnîşan pir caran ji bo PCR tenê têne avêtin. DNase û PCN tubes-RNase-free, pîşesaziyên aerosol-resistant û di kulikê çerm de bi karûbarên UV-ê jî di heman demê de rêbaz hene ku pirsgirêkên kêmtir bikin.
02 Chemical Components
- 18 heta 24 bargehên xwe hene
- Avahiyek navîn tune (wekî, lûksên porfikan)
- Dabeşkirina dabeşkirina G / C û A / T cotan hene
- Di dawiya 3-ling de bi hev re ne hev in
- Temperature (Tm) di navbera 5-10 dezgehên Celciusê de binê germkirina navîn, ku di navbera 55 û 65 dûr de Celcius e
Tm ji her du pîvanan jî ji bo encamên baştirîn jî wekhev be.
03 Reaction Mix: Şablon û Primer
Zimên herî optîparêz di navbera 0.1 û 0.6 micromoles / L de ne. Hejmarên şablonê li ser duyemîn DNA ((mirov, bacterial, plasmid) girêdayî ye.
Bi gelemperî kelek kêmahiyê, stratejiyên din hene ku encamên baştir bikin, wekî hejmara hejmaran zêde dibe an bikaranîna "destpêka germ." Her dem bi temamên nû re reaksiyonên kontrolkirina erênî yên erênî yên tehlîm bikin, da ku ew di bin mercên ceribandî yên taybet de kar bikin.
04 Reaction Mix: Enzyme Çalakiya
Hundirkirina MgCl2 di tevlîheviya reaksiyonê de dikare bandora PCR bandor bike û dikare reaksiyonên bêtir tundûtûjtirtirîn rola xwe bide. Formên cenazeyê yên Magnesium bi dNTP-ê re veşartina rastê hilberînin ku polymerase enzyme nas dikin.
Wekheviyên hemî çar dNTP jî jî alîkariya alîkariya çewtiyê ya polymerase kêm bikin. Hinek additives, wekî betaine, BSA, dermanxaneyê, DMSO, glycerol û pyrophosphatase dikarin bi taybetmendiya enzyme an çalakiya reaksiyonê bandor bikin.
05 Tîpa Thermotycler
Dema ku ji bo amûrên pisporê pargîdaniyê, bîr bînin bîra xwe ku hin thermocyclers hin ji hêla kesên din ve girêdayî ye, hebûna germî, hewceyî xwestin.
Ev yek yek e ye ku ew erzan dibe ku di dema demeke dirêj de naxwazin dema ku hûn bi reaksiyonek felikî re an jî pisporên ku hewceyê germê germek hûrgelan hewce ne.
Tîlên reaksiyonên tepîkirî yên tehlîlên ku ji bo ku hûn tê bikaranîn, tedbîrên rastîn ên thermocycler çêbikin ku hûn jî bikar tînin, herweha alîkarî bi bandorên reaksiyonê çêtir bikin.
06 Sîstema Çepê
Berhemkirina zêdekirina dikare bi dirêjkirina her 20 cycles, dirêjkirina enzyme ya kêmtir şablonê bidestxistin. Bi gelemperî, ji kêmtir 40 çolan têkilîn e ku ji hêla 10 molekulên kolektîf kêm bi hûrgelan pir girîng e ku bi gellek etrîdê bromide-stained agarose -stained dîtin.